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苏丹红ELISA快速检测试剂盒
      
苏丹红ELISA快速检测试剂盒
本试剂盒仅供研究使用
产品编号：CSB-E12032f
检测范围：0.312 ng/ml-10ng/ml
最低检测限：0.2 ng/ml
特异性：本试剂盒可用于快速检测苏丹红。与对位红有一定交叉反应
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定鸡蛋，辣椒粉，辣椒酱等样品中的苏丹红残留。
说明
1.        试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2.        浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3.        中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4.        刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
本试剂盒采用酶联免疫间接竞争法检测苏丹红。微孔板上包被有苏丹红偶联物。加入苏丹红抗体和苏丹红标准品
或样品，游离苏丹红与微量反应板上的苏丹红结合物竞争结合抗苏丹红抗体，没有结合的抗体被洗去，再向微孔中加
辣根过氧化物酶标记二抗，与结合在反应板上的抗体作用一定时间，洗去多余的辣根过氧化物酶标记二抗。再向
反应孔中加入相应反应底物TMB，作用一定时间后，结合的酶结合物将TMB转化为蓝色，转化成最终的黄色。颜色的
深浅和样品中的苏丹红呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.        已包被苏丹红偶联物的酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.        标准品（Standard）：6×250ul/瓶。
3.        样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.        辣根过氧化物酶标记二抗稀释液（HRP-anti-antibody Diluent）：1×20ml/瓶。
5.        苏丹红单克隆抗体：1×60μl/瓶（1：100）
6.        辣根过氧化物酶标记二抗（HRP-anti-antibody ）：1×120μl/瓶（1：100）
7.        底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
8.        浓洗涤液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
9.        终止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。
需要而未提供的试剂和器材
1.        标准规格酶标仪
2.        高速离心机
3.        电热恒温培养箱
4.        超声清洗器
5.        离子交换小柱（PCX）
6.        氮气吹干仪
7.        干净的试管和Eppendof管
8.        系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
9.        蒸馏水，容量瓶等
标准品：6瓶，浓度分别为10ng/ml，5ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312ng/ml。样品稀释液直
接作为标准浓度0 ng/ml。
标准品
S1
S2
S3
S4
S5
S5
浓度（ng/ml）
10
5
2.5
1.25
0.625
0.312
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果
才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
临用前分别以样品稀释液稀释苏丹红抗体，以二抗稀释液稀释辣根过氧化物酶标记二抗，稀释前根据预先计算好的每次
实验所需的总量配制（苏丹红抗体每孔50ul，辣根过氧化物酶标记二抗每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10ul苏丹红抗体和辣根过氧化物酶标记二抗加990ul样品稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。
如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.        酶联板使用前用洗液洗板2-3次，每次浸泡1-2分钟，250ul/每孔，甩干。
2.        加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔从高到低分别加标准品或待测样品50ul，
注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，然后在所有孔中加入50ul苏丹红抗体工作液。尽量不触及孔壁，
轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜，37℃反应30分钟（为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液）。
3.        温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，250ul/每孔，甩干。
4.        所有孔中加入100ul辣根过氧化物酶标记二抗工作液。尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜，37℃
反应30分钟。
5.        温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，250ul/每孔，甩干。
6.        依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，一般10-15分钟内，此时肉眼可见标准品的后3-4孔有明显的梯
度蓝色，前3-4孔颜色不明显，即可终止）。
7.        依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了
保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.        用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。
注：
1.        用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2.      每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3.        为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4.        未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、苏丹红抗体和辣根过氧化物酶标记二抗工作液请依据所需的
量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、苏丹红抗体和辣根过氧化物酶标记二抗工作液。
5.        建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐
的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由
标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代
入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1.        当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2.        洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3.        一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.        请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5.        如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
6.        在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7.        底物请避光保存。
8.        不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
9.        本产品适用于大量样本的快速筛查。由于生物试验存在人为及不可预知的影响因素，本试剂盒得到的检测结果仅为参考，
不能据此做出任何结论。本公司不承担由此引起的任何责任。

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