酵母（S.pombe）直接转化试剂盒
本品为分裂酵母（Schizosaccharomycespombe）转化试剂盒。向酵母培养液直接加入目标质粒和专用试剂，即可进行转化。利用独特技术，无需进行感受态细胞调制，经过一晚培养即可直接导入菌体。可简单进行多种基因破坏株的同时导入，因而可进行大量染色体组的筛选。
请注意，本品的使用方法有适合少数检体的“软管法”和适合HT（高通量）的“96孔板法”两种。
[特点]
·加入了目标质粒和专用试剂的一步完成型。
·感受态细胞无需调制。
·使用96孔板可进行多检体处理。
·可使用软管法
·适应HT的低粘性试剂。
[试剂盒内容]
| 20次用 | 100次用 | 500次用 |
Sp TransformationReagent | 2.25ml X 1支 | 11.5ml X 1支 | 57ml X 1支 |
Carrier DNA(5mg/ml) | 0.1ml X 1支 | 0.5ml X 1支 | 1.25ml X 2支 |
[操作方法1]
■ 96孔板法
96孔板
↓←加入25μl YES培养基
菌种接入
↓在28~30℃情况下静置培养18~24小时
菌体悬浊
↓←将100μl质粒和试剂混合液混合
在46℃的恒温箱中放置2小时
10μl spotting
↓在28~30℃的恒温箱中放置5~7日
转化的酵母
1）菌体接入时请使用YPD琼脂培养基。使用YES琼脂培养基可能导致较低的转化率。准备好的菌落可冷藏保存一个月。
2）* 质粒·试剂混合液的调制
·Sp TransformationReagent……90μl ·质粒DNA……………………………1μg ·CarrierDNA………………………4μl 调制100μl灭菌水 （处理多个受检体时请按情况调制所需量） |
3）在42℃中放置4小时或在37℃中放置6小时也可达到效果。
[操作方法2]
■ 软管法
<</span>酵母的培养>
2mlYES培养基
↓←菌种接入，调制至OD600：0.2
↓←取1ml至14ml的试管中
↓←在28~30℃振荡培养,至OD600：6.0~7.0
培养酵母液……（A）
<</span>转化>
1.5ml的离心管
↓←将100μl质粒和试剂混合液混合
↓←加入25μl培养酵母液（A）在37℃恒温箱中放置2小时
预处理
↓在28~30℃的恒温箱中放置5~7天
转化后的酵母
1）菌种接入时请使用YPD琼脂培养基。使用YES琼脂培养基可能导致较低的转化率。准备好的菌落（96孔板）可冷藏保存一个月。
2）菌体浓度会影响转化率，请确认OD600值
3）进行转化，酵母液请准备30次用的份量
4）* 质粒·试剂混合液的调制
·Sp TransformationReagent……90μl ·质粒DNA……………………………1ug ·Carrier DNA………………………4μl 调制100μl灭菌水 |
[使用例子] 使用96孔板法进行转化
用96孔板法进行转化，在质粒（Leucine合成酶标识Marker）中加入S.pombe（Leucine合成酶破坏株）后，在SD培养基（-Leucine）里预处理和培养。
[使用次数]
| 20次用 | 100次用 | 500次用 |
96孔板法 | - | 1板（100孔） | 5板（500孔） |
软管法 | 20管 | 100管 | 500管 |
[转化率] 250cfu/μg以上
追求高转化率时，参照以下URL里的高效率转化步骤（软管法）。但是，此方法需要离心分离，会降低操作的简便性。
[保存条件]
-20℃保存
注）解冻产品请不要超过10次。为避免此状况，建议预先细分成合适的剂量，再保存到-20℃的环境中。
[产品资料]
产品编号 | 品名 | 规格 | 容量 |
290-64301 | S.pombe Direct Transformation KitWako | 基因研究用 | 20次用 |
296-64303 | 100次用 |
294-64304 | 500次用 |