【宝英生物】罗氏应用科学部（Roche Applied Science）是最早致力于向用户提供非放射标记技术的公司之一，让更多的科研工作者们可以避免使用危险的放射性同位素。自1995年德国宝灵曼公司的地高辛产品上市以来，尽管陆续有许多出色的竞争者涉足这一领域，尽管有定量PCR技术的应用，DIG系统仍然是非放射性高效标记—检测技术的首选，被广泛地应用各种膜杂交及原位杂交技术中。不久，德国宝灵曼公司的地高辛系列产品被罗氏收购。地高辛产品现在罗氏应用科学部生产与销售。
技术原理：
地高辛标记技术源于一种从洋地黄类植物（毛地黄和毛花毛地黄）中提取的类固醇（Steroid）物质—— Digoxigenin（DIG），在医学上可用于治疗各种急性和慢性心功能不全以及室上性心动过速、心房颤动和扑动等疾病。由于洋地黄植物的花和叶片Digoxigenin在自然界中的唯一来源，因此抗DIG的抗体不会与其他的生物物质结合，从而可以满足特异性标记的需要。这一点，正是DIG胜于生物素(Biotin)的地方——同样是小分子标记物，生物素广泛存在于各种组织中，对于灵敏度很高的标记检测实验来说，样品自身含有的内源生物素，就会对结果产生干扰。地高辛就能够很好地避免这个问题。
技术特点：
与放射性标记和检测技术相比较，DIG 系统具有一下多个优势：
l 高灵敏度，完全可满足实验需要，某些方面甚至可与放射性标记的灵敏度向媲美
l 曝光时间短，结果显示时间以分钟计算，无需几小时甚至几天的自显影过程
l 安全环保，不接触放射性物质，不会对环境造成污染
l 探针可重复使用，最少可以稳定储存一年
l 可轻松进行探针拨离和重探
l 凭借多年的经验和众多使用者的反馈意见，提供全面的应用指南
应用领域：
地高辛系统能够安全高效地标记DNA, RNA或是寡聚核苷酸探针，这些探针可以被广泛地应用在
l Southern blotting, dot blotting
l Northern blotting
l Array
l Colony hybridization
l In situ hybridization
l ELISA
技术细节：
DIG 通过一个含有11个碳原子的空间臂与尿嘧啶核苷酸上的C5位置相连，一定浓度的DIG标记的核苷酸可以通过DNA polymerase (如E.coli DNA Polymerase, T4 DNAPolymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNAPolymerase ）、RNA polymerase(如SP6, T3或T7 RNA Polymerase)或是末端转移酶（Terminal Transferase）的作用掺入到核苷酸探针中；也可通过随即引物标记（random primed labeling）, 缺口平移（nicktranslation），PCR，3’端标记/加尾或是体外转录制备带有DIG标记的探针。当然也可以通过化学合成的方法进行核苷酸的标记。
Fig. Structure of Alkali-liable Digoxigenin(DIG)-dUTP
对于DIG 标记探针的杂交检测，可选用连接有碱性磷酸酶（alkaline phosphatase），过氧化物酶(peroxidase),荧光素（fluorescein）,若丹明（rhodamine）或是胶体金（colloidalgold）高亲和性的抗DIG抗体共轭物；也可选用不带任何共轭连接的抗DIG抗体和二级抗体。
检测的灵敏度主要依赖于对不同抗DIG抗体共轭物显示方法的选择。以连接有碱性磷酸酶的抗DIG 抗体为例：即可以使用NBT或BCIP做底物的显色法，也可以使用HNPP荧光碱性磷酸酶底物，检测的灵敏度常规可达到0.1pg (Souther blot)。
| 编号 | 产地 | 规格 | 价格￥ |
地高辛DNA标记和检测试剂盒 | | Roche | Kit | 7795 |
DIG-11-dUTP随机引物法标记DNA, 碱性磷酸酶(AP)生色反应检测,标记探针用于Southern、Northern和斑点杂交以及菌落和噬菌体筛选。组成: 未标记对照DNA1; 未标记对照DNA2;DNA稀释液; DIG-标记对照DNA; 六核苷酸混合物; Klenow 2u/μl; 封闭液; BCIP/NBT;10×dNTP标记混合物;抗-地高辛-碱性磷酸酶复合物。一个Kit可用于25次标记反应和50次检测(100cm2膜),-20℃保存。 |
DIG-HighPrime DNA Labeling and DetectionStarter Kit I 高效DNA地高辛标记和检测试剂盒I | 11745832910 | Roche | Kit | 4872 |
比普通DIG随机引物法标记效率高, 操作简单,可用于Southern、Northern和斑点杂交以及菌落和噬菌体筛选。一个Kit可用于12次标记反应和24次检测反应。组成:5×DIG-高效标记试剂; 未标记对照DNA, PBR328; DNA稀释液; 抗-DIG-碱性磷酸酶复合物;NBT/BCIP储存液; 10×封闭液; DIG定量复试纸条; DIG对照试纸条,-20℃保存。 |
Detection Starter KitII | | Roche | Kit | 4998 |
比普通DIG随机引物法标记效率高,采用CSPD化学发光检测灵敏度更高。一个Kit可用于12次标记反应和24次检测反应。组成: 5×高效DIG标记复合物;未标记对照DNA, PBR328; DNA稀释液; 抗-DIG-碱性磷酸酶连接物; CSPD; 10×封闭液; DIG定量试纸条;DIG对照试纸条, NBT/BCIP储存液;-20℃保存。 |
DIG DNALabeling Kit 地高辛DNA标记试剂盒 | | Roche | 40T | 6922 |
随机引物扩增法以DIG-11-dUTP标记DNA;DIG标记探针可用于各种膜杂交。 |
DIG Nucleicacid Detection Kit 地高辛核酸检测试剂盒 | 11175041910 | Roche | Kit | 4612 |
NBT/BCIP显色法检测, 灵敏度可达0.1pg同源DNA;可检测40张100cm2杂交膜。-20℃保存。 |
DIGOligonucleotide 3’-End LabelingKit 寡核苷酸3’末端地高辛标记试剂盒 | 3353575910 | Roche | 25T | 6636 |
通过末端转移酶以DIG-11-ddUTP标记14-100bp的寡核苷酸探针3’端用于各种膜杂交和原位杂交。每个反应可标记100pmol的寡聚核苷酸。 |
DIG Oligonucleotide Tailing Kit 寡核苷酸加尾地高辛标记试剂盒 | 3353583910 | Roche | 25T | 5594 |
通过末端转移酶以DIG-11-ddUTP在寡核苷酸探针3’端加一平均长度50bp(10-100bp)的寡核苷酸,用于DNA/RNA膜杂交和原位杂交。每个反应可标记100pmol的寡聚核苷酸。 |
地高辛RNA标记试剂盒(SP6/T7) | 11175025910 | Roche | 2´10T | 6779 |
由SP6或T7 RNA聚合酶通过转录反应过程标记RNA,1mg模板可产生约10mg标记RNA用于杂交。-20℃保存。组成:pSPT18 DNA, pSPT19 DNA, 对照DNA1, 对照DNA2, DIG标记对照RNA, NTR标记混合物,转录缓冲液, RNase抑制剂, 无RNase的DNase I, SP6 RNA聚合酶, T7RNA聚合酶。 |
PCR DIGProbe Synthesis Kit PCR地高辛探针合成试剂盒 | 11636090910 | Roche | 25T | 3200 |
标记的探针可在Southern杂交后从5-10mg的人基因组DNA检测出单拷贝基因,是从少量DNA模板制备大量探针的最有效、最经济的方法。 |
| 12039672910 | Roche | 10T | 4511 |
包含标记DIG RNA及进行Northern印迹的所有必需试剂, 配合DIG Wash and Block Buffer Set方便进行Northern印迹; 能作10个标记反应及10次检测(100mm2膜)。特别适合初用者使用; 标记混合物经最优化, 配合提供的化学发光底物CDP-Star, 能产生最高的灵敏度。 |
DIG Luminescent Detection Kit 地高辛发光检测试剂盒 | 11363514910 | Roche | Kit | 5023 |
CSPD化学发光法检测, 灵敏度可达0.03pg同源DNA;可检测50张100cm2杂交膜。 |
DIG HighPrime 高效地高辛DNA标记试剂 | | Roche | 40T | 3100 |
标记DNA探针, 只需一步操作, 标记效率较通常随机引物法高3倍。40T |